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正置生物顯微鏡百科知識
發(fā)布時間:2025-07-11 09:20:52

定義

正置生物顯微鏡(Upright Biological Microscope)是一種光學(xué)顯微鏡,其物鏡位于樣本上方,照明系統(tǒng)位于樣本下方。主要觀察透射光下的薄樣本(如組織切片、細(xì)胞涂片等),是生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、病理學(xué)等領(lǐng)域的基礎(chǔ)科研與診斷工具。


核心結(jié)構(gòu)與功能

1. 光學(xué)系統(tǒng)

  • 物鏡(核心部件):

    • 位于樣本上方,通常配備4×、10×、40×、100×(油鏡)等多級放大鏡頭。

    • 數(shù)值孔徑(NA):決定分辨率(NA越大,分辨率越高)。

  • 目鏡:

    • 標(biāo)準(zhǔn)為10×或15×,與物鏡組合實現(xiàn)總放大倍數(shù)(例:40×物鏡 + 10×目鏡 = 400×)。

  • 聚光鏡:

    • 位于樣本下方,聚焦光線至樣本,配備孔徑光闌(調(diào)節(jié)對比度)和視場光闌(減少雜光)。

2. 機(jī)械系統(tǒng)

  • 載物臺:

    • 固定玻片,可手動/電動操控X-Y軸移動(精度達(dá)微米級),帶標(biāo)本夾。

  • 調(diào)焦裝置:

    • 粗調(diào)焦旋鈕(快速升降) + 微調(diào)焦旋鈕(精細(xì)對焦,精度約2μm)。

  • 物鏡轉(zhuǎn)換器:

    • 可旋轉(zhuǎn)切換不同倍數(shù)物鏡,保持齊焦(切換后僅需微調(diào))。

3. 照明系統(tǒng)

  • 透射光源:

    • 鹵素?zé)簦ㄉ珳亟咏展猓┗颍蹋牛臒簦ü?jié)能、長壽命),亮度可調(diào)。

  • 柯勒照明(K?hler Illumination):

    • 標(biāo)準(zhǔn)配置,確保光線均勻、無眩光,提升成像質(zhì)量。


工作原理

  1. 光路路徑:
    光源 → 聚光鏡 → 樣本(透射)→ 物鏡 → 目鏡/攝像頭 → 人眼或成像設(shè)備。

  2. 放大與分辨:

    • 物鏡初級放大實像 → 目鏡二次放大虛像。

    • 分辨率極限:≈200nm(可見光波長限制),油鏡可提升至≈140nm。


關(guān)鍵特點

特性說明
樣本類型需制備為薄切片/涂片(厚度≤10μm),置于載玻片上,加蓋玻片封片。
成像模式主要支持明場觀察(Brightfield),可選配相差、暗場、熒光等模塊擴(kuò)展功能。
操作方式觀察時物鏡接近樣本,需避免鏡頭觸碰玻片(高倍鏡工作距離短,油鏡僅0.1mm)。
適用場景固定樣本的精細(xì)結(jié)構(gòu)觀察(如細(xì)胞核、染色體、病原體)。

應(yīng)用領(lǐng)域

  1. 醫(yī)學(xué)診斷:

    • 病理學(xué)(組織切片癌變分析)、血液學(xué)(血涂片寄生蟲檢測)。

  2. 生物學(xué)研究:

    • 細(xì)胞形態(tài)學(xué)、微生物鑒定(細(xì)菌/真菌)、植物解剖。

  3. 教學(xué)與培訓(xùn):

    • 高校實驗室基礎(chǔ)顯微觀察教學(xué)。

  4. 工業(yè)質(zhì)檢:

    • 材料表面缺陷、纖維結(jié)構(gòu)分析(需反射光配件)。


正置 vs. 倒置顯微鏡

特性正置顯微鏡倒置顯微鏡
物鏡位置樣本上方樣本下方
適用樣本薄切片、玻片固定樣本活細(xì)胞(培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶)、厚組織塊
工作距離較短(高倍鏡易觸玻片)較長(可直接觀察培養(yǎng)容器底部)
主要用途病理切片、固定細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)、活體觀察

技術(shù)演進(jìn)與高端配置

  • 模塊化擴(kuò)展:

    • 熒光附件:激發(fā)塊+汞燈/LED光源,用于特異性標(biāo)記(如免疫熒光)。

    • 相差環(huán):觀察未染色活細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。

    • DIC(微分干涉相襯):提升三維立體感與對比度。

  • 數(shù)字化升級:

    • 內(nèi)置攝像頭 → 實時圖像采集、測量分析軟件(細(xì)胞計數(shù)、尺寸測量)。

    • 電動化:自動聚焦、載物臺掃描、多視野拼接。

  • 共聚焦兼容:

    • 部分高端正置鏡可升級為激光共聚焦顯微鏡,實現(xiàn)光學(xué)切片與3D重構(gòu)。


使用注意事項

  1. 玻片清潔:避免指紋或灰塵影響成像。

  2. 油鏡操作:

    • 滴浸油后輕調(diào)避免產(chǎn)生氣泡,使用后立即用二甲苯拭鏡紙清潔油漬。

  3. 光源管理:

    • 關(guān)閉光源前調(diào)至最低亮度,延長燈泡壽命;汞燈需冷卻后重啟。

  4. 防震防潮:

    • 放置穩(wěn)定平臺,存放于干燥環(huán)境(避免鏡頭霉變)。


選購要點

參數(shù)建議
光學(xué)質(zhì)量物鏡需鍍膜(消色差/平場復(fù)消色差),支持齊焦性。
照明類型LED光源優(yōu)于鹵素?zé)簦ǖ桶l(fā)熱、長壽命)。
擴(kuò)展性預(yù)留熒光/DIC接口,兼容數(shù)字化配件。
品牌與售后尼康、奧林巴斯、蔡司、徠卡等主流品牌,確保維修與校準(zhǔn)支持。

總結(jié)

正置生物顯微鏡是微觀世界觀察的基石設(shè)備,以其對固定樣本的高分辨率成像能力,成為生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)診斷的必備工具。隨著模塊化與數(shù)字化發(fā)展,其功能已從基礎(chǔ)形態(tài)學(xué)拓展至多維動態(tài)分析,持續(xù)推動科研與臨床的進(jìn)步。

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